《土壤质量 呼吸曲线法测定土壤微生物区系的丰度和活性》（征求意见稿）

本文件规定以呼吸曲线法测定土壤中需氧、异养微生物生物量与活性：对未处理土样和添加葡萄糖—铵—磷酸盐底物后的土样连续监测CO₂释放量或O₂消耗量，据曲线计算基础呼吸速率、底物诱导呼吸速率、呼吸活性熵、特定生长率、峰值到达时间和呼吸累积量等参数，用于土壤质量监测与土壤及土壤基质潜在生态毒性的评估。本次由指导性技术文件升级为推荐性国家标准，技术内容等同采用ISO 17155:2012。

方法框架与关键控制条件

采样、处理与贮存执行GB/T 32725，每个样品至少设3次平行测定。测定前土样在20 ℃下预培养3～4 d，含水量控制在最大持水量的40%～60%或基质吸力0.01～0.3 MPa；先测基础呼吸速率至稳定，再按每克土10 mg添加底物，有机质含量大于5%的土壤按每克腐殖质加0.2 g。粒度分布、含水量、持水能力、pH和有机质含量分别按ISO 11277、ISO 11465、ISO 14238附录A、ISO 10390和ISO 10694确定。

毒性试验与剂量—效应

本文件方法可用于测定化学品对土壤微生物的影响。受试土壤宜选有机碳质量分数0.5%～1.5%、小于20 μm颗粒不超过20%的样品；设5个对数浓度加空白对照，每处理一式三份，建立剂量—效应关系并估算EC₁₀和EC₅₀。受试物可以水溶液、有机溶剂或预涂石英砂方式加入，有机溶剂体积分数控制在1%以下并另设溶剂对照。

结果判读

污染土壤常表现为呼吸活性熵升高和峰值到达时间延长：矿质耕地、草地土壤Q_R大于0.3，矿质森林土壤大于0.4，有机质层土壤大于0.6，且Δt_peakmax超过约50 h时，提示存在污染胁迫。曲线偏离典型指数增长或出现双峰，可作为辅助判据；外源化学品响应归纳为死亡、不耐受、未见效应和刺激增强四类，实践中以不耐受和未见效应最常见。